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    找到 作者 包含"王其" 1條結果
    • Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE-HIF-1α的構建和表達鑒定

      目的 克隆和構建攜帶人低氧誘導因子-1α(HIF-1α)的Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE-HIF-1α。方法 以缺氧的肝癌細胞株HepG2總RNA為模板,進行RT-巢式PCR,獲得HIF-1α的cDNA,克隆入Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE2hyg,酶切重組子鑒定。將構建好的PTRE-HIF-1α用脂質體法轉入HepG2Tet-on細胞,在強力霉素的作用下,用RT-PCR及Western blot法鑒定重組質粒的表達。結果 擴增出HIF-1α的cDNA測序結果與Genbank記載完全一致,并成功克隆入PTRE2hyg,將反應質粒PTRE-HIF-1α轉入HepG2Tet-on細胞,可以完整有效表達HIF-1α且受強力霉素的調控。結論 成功克隆和構建攜帶HIF-1α基因的Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE-HIF-1α,并證明其表達能在HepG2Tet-on細胞中受強力霉素調控。

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