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    • 人羊水來源c-kit+ 間充質干細胞的生物學特征和心肌誘導分化

      【摘 要】 目的 探討人羊水來源c-kit+ 間充質干細胞(c-kit+ human amniotic fluid-derived mesenchymal stemcells,c-kit+ HAFMSCs)的生物學特征及心肌誘導分化能力。 方法 通過產前診斷或自愿引產獲取50 份孕中期羊水標本,經流式細胞儀分選c-kit+ HAFMSCs,MTT 法觀察細胞增殖情況,并通過流式細胞儀、細胞免疫化學染色觀察行細胞表型鑒定。在體外經成骨及成脂誘導分化,于誘導培養后21 d 采用von Kossa 染色觀察鈣沉積顆粒,油紅O 染色觀察脂滴形成情況。實時熒光定量PCR 檢測細胞經5 氮-2’ 脫氧胞苷心肌誘導前后,NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4 種心肌特異性基因表達情況。 結果 經流式細胞儀分選,人孕中期羊水中c-kit+ HAFMSCs 含量約為貼壁細胞的3.07% ± 1.03%;體外增殖迅速,表達MSCs 表面標志CD29、CD44、CD73、CD90、CD105,不表達造血干細胞表面標志CD34、CD45;表達人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-ABC,不表達HLA-DR。細胞免疫化學染色示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、Oct-4 染色呈陽性,CD34、CD45 染色呈陰性。MTT 檢測示第5、10、15 代c-kit+ HAFMSCs 具有相似的生長曲線。成骨和成脂誘導培養后21 d,細胞內有鈣鹽沉積和脂滴形成。實時熒光定量PCR 檢測示,心肌誘導后14 d, NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4 種心肌特異性基因表達均較誘導前明顯增加,差異有統計學意義(P lt; 0.05)。 結論 通過流式細胞儀分選的c-kit+ HAFMSCs 在體外可以誘導分化為心肌樣細胞,可能成為心肌再生性治療的種子細胞。

      發表時間:2016-08-31 04:22 導出 下載 收藏 掃碼
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