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    • 流式細胞術檢測大鼠肺泡巨噬細胞吞噬熒光標記細菌的方法學探討

      目的建立流式細胞術檢測大鼠肺泡巨噬細胞(AM)吞噬 AlexaFluor 488(AF488)熒光染料標記細菌的方法。方法用不同濃度的 AF488 標記金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌,流式細胞術檢測 AF488 對上述細菌的標記率和平均熒光強度;AM 與不同濃度比例的 AF488 標記的細菌于 37 ℃ 共孵育 2、4、6 和 8 h,洗滌后加臺盼藍淬滅未被吞噬的細菌熒光,流式細胞術檢測 AM 平均熒光強度、吞噬率和吞噬指數;激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察 AM 吞噬細菌的情況及分布。結果AF488 的濃度大于 50 μg/mL 時,金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的標記率均大于 92%(P<0.05),金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的標記率在熒光染料濃度大于 50 μg/mL 便已迅速達到上限。隨著孵育時間的延長,AM 的吞噬率從孵育 2 h 的 20.4% 升高到 8 h 的 76.5%。隨著細菌比例的增加,AM 的吞噬率從 1∶10 的 7.7% 升高到 1∶300 的 85.1%。結論流式細胞術檢測 AM 吞噬 AF488 熒光染料標記的細菌是測定 AM 吞噬活性的有效方法,但染料濃度、孵育時間和細菌比例均會對結果產生影響。

      發表時間:2019-09-25 09:48 導出 下載 收藏 掃碼
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