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    • 新型聯合基質橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端促進運動功能恢復實驗研究

      目的 研究新型聯合基質——BMSCs- 去上皮細胞羊膜(denuded human amniotic membrane,DHAM)橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端,促進軸突再生及提高后肢運動功能的作用。 方法 取健康產婦正常剖宮產術后自愿捐獻的羊膜,經聯合消化法徹底去除表面上皮細胞制備DHAM,并行HE 染色觀察。健康4 周齡雌性Wistar 大鼠4 只,取骨髓行BMSCs 分離、培養,取第4 代細胞以PKH26 標記后,以1 × 105 個/cm2 密度接種于DHAM 上制備聯合基質(BMSCs-DHAM)。倒置相差顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 生長狀態。另取8 周齡雌性Wistar 大鼠40 只,體重200 ~ 220 g, 制備T9 脊髓橫斷性損傷模型,隨機分為4 組,每組10 只。A、C 組分別用BMSCs-DHAM 和單純DHAM包裹脊髓的2 個 斷端,B、D組分別于脊髓損傷中心注射10 μL 細胞濃度為1 × 104 個/μL 的BMSCs 和等量生理鹽水。術后12 周采用BBB 運動評分檢測大鼠后肢運動功能恢復情況,行皮層運動誘發電位(motion evoked potential,MEP)測定;生物素化葡聚糖胺(biopinylated dextan amine,BDA)順行示蹤檢測及神經絲蛋白200(neurofilament protein 200,NF-200)免疫熒光染色觀察。 結果 HE 染色顯示聯合消化法成功制備DHAM。鏡下觀察到BMSCs 在DHAM 上生長狀態良好。術后12 周,A 組BBB 評分達(12.50 ± 1.26)分,明顯高于其余各組(P lt; 0.05)。MEP 測定顯示,A 組潛伏期(3.52 ± 2.45) ms 及波幅(480.68 ± 18.41)μV,恢復效果優于其余各組(P lt; 0.05)。BDA 順行示蹤觀察示,A 組損傷平面以下BDA 通過損傷部位的軸突再生率為54.12% ± 3.30%,均高于其余各組(P lt; 0.05);且A 組NF-200 免疫熒光染色亦可見大量再生軸突通過損傷部位。 結 論 新型聯合基質BMSCs-DHAM 一定程度上提高了脊髓橫斷性損傷大鼠的后肢運動功能,是一種具有廣泛應用前景的基質材料

      發表時間:2016-09-01 09:08 導出 下載 收藏 掃碼
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