三維（3D）細胞培養模型是將具有3D結構的載體與不同類型的細胞在體外共培養，以模擬體內微環境的系統。這種新型細胞培養模型經證明與體內的自然系統接近，在細胞附著、遷移、有絲分裂和凋亡等過程產生不同于單層細胞培養的生物學反應，因此可作為評價活性物質動態藥理作用和癌細胞轉移過程的理想模型。本文對比分析了二維（2D）和3D模型培養下細胞生長發育的不同特點，介紹了3D細胞培養模型的建立方法，重點總結了3D細胞培養技術在腫瘤模型和腸道吸收模型中的應用進展，并揭示了3D細胞培養模型在活性物質評估和篩選中的應用前景。通過本文綜述，期望可為新型3D細胞培養模型的開發和應用提供參考。