• 1. 常州市亙從生物力學研究中心(江蘇常州 213164);
  • 2. 寧夏人體組織器官庫(銀川 750004);
  • 3. 上海亞朋生物技術有限公司(上海 201201);
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目的 探討脫鈣骨基質(demineralized bone matrix,DBM)中 BMP-2 含量與其體內/外成骨活性的相關性,以期選擇一種簡易、便捷的評價 DBM 成骨活性的方法。方法 取 9 具人尸體左側股骨中段組織,采用動態脫鈣工藝制備 DBM(S1~S9),同時制備滅活 DBM(對照)。分別采用蛋白酶抑制劑法、膠原酶法、鹽酸胍/EDTA 法、RIPA 裂解液法提取 S1~S9 以及滅活 DBM 中 BMP-2,測量比較不同 DBM 間 BMP-2 含量差異。取 S1~S9 以及滅活 DBM,分別與小鼠胚胎成骨細胞 MC3T3-E1 共培養,采用 MTT 法及熒光染色檢測細胞增殖,同時檢測 ALP 活性。取 30 只 BALB/c 雄性裸小鼠分為 10 組,分別為 S1~S9 DBM 組(S1~S9 組)以及滅活 DBM 組(對照組),每組 3 只。于各組小鼠雙側后肢大腿中部制備肌袋,植入對應 DBM 材料,術后 4 周取材行 HE 染色觀察并半定量評價(新骨形成評分)。結果 不同供體骨制備的 DBM,其 BMP-2 含量存在差異;同一供體骨制備的 DBM,經不同提取方法獲得的 BMP-2 含量也不同,其中鹽酸胍/EDTA 法提取效率最高。體外成骨性能評價,共培養后各時間點 S4、S6 組細胞增殖、ALP 活性均較其他組明顯增高(P<0.05),且 7 d 時 S4 組細胞增殖最顯著(P<0.05);熒光染色示各組成骨細胞狀態均良好,但 S1、S2、S3、S4、S6 組成骨細胞多于其他組。體內異位成骨誘導實驗示,術后 4 周 S1~S6 組植骨區域均可見軟骨和新骨生成,并且隨著 BMP-2 含量增加,材料誘導新骨生成越多,新骨形成評分較高(P<0.05);其中 S4、S6 組骨新生區域含有大量軟骨細胞和成骨細胞。結論 BMP-2 定量檢測結合體外成骨細胞增殖分化實驗可用于評估 DBM 成骨活性。

引用本文: 李淼, 白玉龍, 潘小亮, 汪晶晶, 陳維明, 駱井萬, 胡凱, 陳金發. 脫鈣骨基質中BMP-2含量與其體內/外成骨活性的相關性研究. 中國修復重建外科雜志, 2021, 35(5): 620-626. doi: 10.7507/1002-1892.202012006 復制

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